„Ladykillers“ spielt in der kleinen Stadt Taylor, Texas, und erzählt von Mrs. Marghret Jackson, einer charmanten älteren Dame, die ein freies Zimmer zur Miete anbietet. Professor Markus, ein höflicher und geheimnisvoller Herr, interessiert sich für das Zimmer und fragt höflich, ob es in Ordnung wäre, wenn gelegentlich seine „musikalischen“ Freunde vorbeikommen, um „Proben“ abzuhalten. Mrs. Jackson, die eine große Leidenschaft für Musik hat, stimmt bereitwillig zu.
Was Mrs. Jackson nicht weiß, ist, dass Professor Markus und seine „musikalischen“ Freunde eine ganz andere Art von „Proben“ planen: den Überfall auf einen Geldtransporter! Als der Cellokasten, der das gestohlene Geld enthält, unglücklicherweise vor Mrs. Jacksons Augen auf den Boden fällt und seine kostbare Ladung offenbart, geraten die Dinge außer Kontrolle.
Jetzt bleibt den Gaunern nur eine Lösung: Sie müssen die einzige Zeugin ihrer kriminellen Machenschaften zum Schweigen bringen – und das zu jedem Preis.